跨膜细胞电阻仪是一种用于测量细胞层电阻的仪器,广泛应用于研究细胞间的紧密连接和屏障功能。在实验过程中,正确操作跨膜细胞电阻仪并注意相关事项至关重要。
一、操作步骤
1.准备实验材料:跨膜细胞电阻仪、细胞培养器、细胞培养基、胰酶、离心管、移液器等。
2.细胞培养:将细胞种植在细胞培养器上,加入适量的细胞培养基。将培养器放入37℃、5%CO2的培养箱内培养,直至细胞达到适当的传代比例。
3.装载细胞:将细胞悬液用胰酶消化后,计数并调整细胞浓度。将一定数量的细胞悬液加入到仪器的上室和下室中,确保细胞能够覆盖整个膜表面。
4.测量电阻:将仪器接入恒温水浴槽,保持温度在37℃。使用移液器轻轻搅拌下室中的细胞悬液,以消除浓度极化现象。记录初始电阻值。
5.数据分析:在一定时间内监测并记录电阻值的变化,计算电阻的相对增减率。分析数据,评估细胞层的紧密连接和屏障功能。
二、注意事项
1.选择合适的细胞株:不同类型的细胞株具有不同的生理功能和特性,因此在实验前需充分了解所选细胞株的特性,以确保实验结果的准确性。
2.维持适宜的培养条件:细胞的生长和分化受到诸多因素的影响,如温度、湿度、pH值等。在实验过程中,应严格控制这些条件,以保证细胞的正常生长。
3.避免污染:细胞培养过程中容易受到细菌、真菌等微生物的污染。因此,在操作过程中应严格遵守无菌操作规程,定期更换手套,并对实验器皿进行消毒。
4.确保仪器的准确性:在使用前,应检查仪器是否工作正常,测量电极是否洁净。测量过程中,应避免电极与细胞或细胞培养基直接接触,以免影响测量结果。
5.实验结果的可靠性:实验数据的准确性受多种因素影响,如操作误差、测量时间、细胞密度等。因此,在实验过程中应尽量减少误差,重复测量并取平均值,以提高实验结果的可靠性。